Гамма-интерферон - набор для определение рецепторов на клетках человека

  Целью этой страницы является систематизация информации по диагностическим системам производства НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОГО ПРЕДПРИЯТИЯ РЕСАН, чтобы пациенты, врачи, иммунологи и все интересующиеся могли отыскать полную и достоверную информацию.

Аналитическая система определения рецепторов гамма-интерферона на клетках человека

НАЗНАЧЕНИЕ:
Специфические рецепторы к гамма-интерферону имеются на поверхности большинства клеток человека, но их экспрессия различна на различных клетках и при различных болезнях. Высокоаффинные рецепторы, содержащие 2 альфа и 2 бета цепи, имеют Т- и В-лимфоциты, NK-клетки, моноциты, макрофаги, фибробласты, нейтрофилы, эндотелиальные и гладкомышечные клетки. Константа связывания для рецепторов ИФН-g равна 1-5•10^-8М.
Взаимодействие гамма-интерферона (ИФН-g) с рецепторами на клетке является первым необходимым этапом начала его действия. ИФН-g может вызывать как защитные, так и патологические эффекты. Он индуцирует дифференцировку миелоидных клеток костного мозга, в результате которой они приобретают высокоаффинные Fcg-рецепторы для связывания мономерной формы IgG. На зрелых гранулоцитах ИФН-g индуцирует экспрессию Fcg-рецепторов промежуточной аффинности, которые связывают только агрегированный IgG. ИФН-g активирует и антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) осуществляемую зрелыми гранулоцитами. ИФН-g является активатором макрофагов и усиливает их противоопухолевую активность. При инфицировании макрофага внутриклеточными паразитами ИФН-g вызывает активацию макрофага, что приводит к гибели паразитов. Подавление внутриклеточных паразитов под действием ИФН-g происходит и в немакрофагальных клетках.
ИФН-g усиливает противоопухолевое действие цитотоксических лимфоцитов. Совместно с лимфотоксином, образуемым как СD4, так и СD8 лимфоцитами, ИФН-g подавляет рост опухолевых клеток. ИФН-g повышает неспецифическую активность NK-клеток, является одним из факторов дифференцировки В-лимфоцитов. Он может либо усиливать, либо подавлять В-клеточный иммунный ответ, на поздних стадиях ИФН-g усиливает секрецию иммуноглобулинов.
Очень важным действием ИФН-g является усиление экспрессии молекул HLA I и II классов на клеточной поверхности, причём ИФН-g быстрее индуцирует экспрессию молекул HLA DR и DP, чем DQ. Если усиление экспрессии молекул HLA I и II классов происходит на патологически изменённой клетке, она становится более доступной мишенью для последующего разрушения. Если это действие направлено на антигенпредставляющую клетку, то усиливается формирование иммунного ответа.
При вирусной инфекции ИФН-g может вызывать значительные изменения поверхности клеточной мембраны, что приводит к нарушению прикрепления и проникновения вируса в клетку. ИФН-g усиливает в клетке синтез фермента олигоаденилатсинтетазы. Олигоаденилатные полимеры активируют эндогенную эндонуклеазу, вызывающую разрушение иРНК и рРНК, нарушая внутриклеточный синтез вирусов. ИФН-g усиливает образование фермента протеинкиназы, вследствие чего подавляется белковый синтез.
ИФН-g активирует остеокласты, усиливая резорбцию костной ткани.
ИФН-g применяют для лечения инфекционных, онкологических, аутоиммунных и аллергических болезней. Эффективная доза ИФН-g находится в широком диапазоне 0,2-10000 МЕ в 1 мл крови, в зависимости от рецепторов на клетках, на которые направлено его действие. Недостаточная доза ИФН-g не приводит к желаемому терапевтическому эффекту, избыточная доза приводит к возникновению серьезных побочных эффектов.

ПРИМЕНЕНИЕ:
С помощью этой аналитической системы и проточного цитометра или флюоресцентного микроскопа или «BIOSCAN-F6000» можно in vitro определить распределение рецепторов к ИФН-g на клетках и индивидуально подобрать оптимальную терапевтическую дозу ИФН-g.

РЕАГЕНТЫ (входящие в набор):
Конъюгат hrIFNG-FITC-01A – 800 мкл, жидкий, 10 мкл на тест.

Рекомбинантный человеческий гамма-интерферон (hrIFNG) – 20 ампул по 1 млн МЕ, сухой.

Ориентировочная стоимость набора:
280 EUR

Гистограммы лимфоцитов:
А – исходное состоянии свободных рецепторов к гамма-интерферону на лимфоцитах (ворота от 6 до 12 каналов, пик – 17 событий).
Б – состоянии свободных рецепторов к гамма-интерферону на лимфоцитах после добавления ИФН-g в дозе 2500 МЕ на 1 мл крови (ворота от 6 до 11 каналов, пик – 8 событий)
В – состоянии свободных рецепторов к гамма-интерферону на лимфоцитах после добавления ИФН-g в дозе 100000 МЕ на 1 мл крови (ворота от 2 до 7 каналов, пик – 11 событий)

A     Б

 

В

Уменьшение свободных рецепторов до 60% от исходного (гистограмма Б), говорит об адекватно подобранной дозе ИФН-g.

Уменьшение свободных рецепторов более чем на 60% от исходного или значительое смещение гистограммы влево (В), говорит об избыточной дозе ИФН-g  и  высокой вероятности осложнений.

[ На главную страницу ][ Контактные реквизиты ][ Карта сайта ]

Многофункциональный флуоресцентный сканер
микробиочипов, клеток и тканей
высокой разрешающей способности
«BIOSCAN-F6000»

«BIOSCAN-F6000» - сравнительно недорогой, быстрый и простой в использовании многофункциональный флуоресцентный роботизированный(автоматизированный) сканер высокой разрешающей способности, позволяющий проводить многопараметрический анализ микробиочипов, клеток и тканей.
Рабочие возможности сканера позволяют использовать его для решения широкого круга диагностических и научно-исследовательских задач в области медицины, ветеринарии, биологии. Сканер имеет в своем составе от 4 до 6 полупроводниковых лазера возбуждения . Преимуществом прибора является возможность переключения режимов работы: «на просвет» или «на отражение». Сканера имеет два функциональных алгоритма: «Работа» и «Исследование». Захват микроизображений осуществляется в реальном времени. Система считывания данных имеет высокую разрешающую способность - не менее 1,25 мкм, равную шагу анализа изображений, осуществляемого видеопроцессором.

ОСНОВНЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МОДЕЛЕЙ МИКРОСКОПА-АНАЛИЗАТОРА «BIOSCAN-F6000»

Параметры и показатели анализатора «BIOSCAN-F6000»	Модель «L»	Модель «M»	Модель «H»
1. Количество лазерных излучателей	4	4	6
2. Спектр лазерных излучателей	385 нм, 405 нм, 488 нм, 532 нм	385 нм, 405 нм, 488 нм, 532 нм	385 нм, 405 нм, 440 нм, 488 нм, 532 нм, 575 нм
3. Количество каналов флуоресценции	6 каналов
4. Объективы	безиммерсионные
5. Размер кадра сканирования, пикселов	1024х1024; 1280х1560
6. Размер минимально различимого объекта	200 нм
7. Режим отображения	реально цветной, псевдоцветной
8. Время сканирования одного кадра	0,8 сек
9. Минимальный шаг перемещения предметного стола	300 нм
10. Минимальный шаг моторизованного фокуса	10 нм
11. Возможность наблюдения и записи микрокадра в белом цвете	На экране дисплея, запись
12. Ёмкость загрузочного устройства	1 стандартный 96-, 384- или 1536-луночный планшет	4 стандартных предметных стекла 25х76 мм	4 стандартных предметных стекла 25х76 мм либо 1 стандартный 96-, 384- или 1536-луночный планшет
12. Параметры монитора компьютера	20", 1280х1600эл.

 

Конструктивно «BIOSCAN-F6000» представляет собой комплекс, состоящий из Приборного модуля и Программно-вычислительного модуля на базе ПЭВМ типа IBM PC, имеющий специализированное программное обеспечение по анализу и обработке результатов исследования с отображением полученных данных на мониторе компьютера в удобном для врача или исследователя виде и выводом на принтер. Конструкция приборного модуля совместима с любыми микробиочипами, нанесенными на стандартные предметные стекла. Кроме того, прибор может работать с микробиочипами, клетками и другими образцами, размещенными в стандартных 96-, 384- и 1536-луночных планшетах.
Специализированное программное обеспечение для сбора и анализа микроизображений совместимо с различными операционными системами (Linux или Windows).
По своим функциональным «BIOSCAN-F6000» заменяет все перечисленные приборы: иммуноферментный анализатор, денситометр, проточный цитометр, ридер биочипов, люменисцентный микроскоп. «BIOSCAN-F6000» позволяет использовать все известные тест-системы к перечисленным приборам. Многофункциональность, разрешающая способно, производительность, спектральный диапазон работы и возможности программной работы превосходят существующие аналоги.

Цена «BIOSCAN-F6000» модели «L» с программным обеспечением и
модели «H» с программным обеспечением - договорная, в зависимости от региона получателя и в 5-7 раз ниже стоимости комплекта заменяемого оборудования.

Ориентировочная стоимость оборудования,
которое позволяет заменить BIOSCAN-F6000:

Иммуноферментный анализатор – 4500 евро.
Денситометр – 6000 евро.
Проточный цитометр – 300 000 евро.
Ридер биочипов – 60 000 евро.
Люменисцентный микроскоп – 12 000 евро.

Общая ориентировочная стоимость заменяемого комплекта оборудования: 380000 евро

 

Предприятие РЕСАН является разработчиком и со-производителем «BIOSCAN-F6000» и заключает официальные контракты на его изготовление и поставку.

 

[ На главную страницу ][ Контактные реквизиты ][ Карта сайта ]

Аналитическая система определения соответствия иммунодоминантных эпитопов антигенов РЕСАН индивидуальным опухолевым антигенам человека

1 тест 2 х 2

Тест определяет выделение гамма-интерферона (ИФН-g) из лейкоцитов свежей гепаринизированной крови под действием  имитаторов опухолевых антигенов РЕСАН. Гамма-интерферон продуцируется преимущественно Т-лимфоцитами, натуральными киллерами, а также В-лимфоцитами в ответ на опасные для организма антигены. Когда указанные клетки имеют дополнительный повторный контакт с аналогичным антигеном, то усиливают синтез и выделение в окружающую среду гамма-интерферона. Если иммунодоминантные эпитопы имитатора опухолевых антигенов РЕСАН соответствуют иммунодоминантным эпитопам опухолевых антигенов конкретного человека, то синтез гамма-имтерферона увеличится на 20% и более.

Циклоспорин А, метотрексат, дексаметазон, 1-альфа,25-дигидрокси витамин Д3 ингибируют синтез гамма-интерферона и должны быть отменены не менее чем за 7 дней до теста.

Определение гамма-интерферона проводят твёрдофазным иммуноферментным анализом с использованием тест системы для количественного определения (QuantiFERON^®- Cellestis Limited, Carnegie, Victoria, Australia; A-8752  «гамма-Интерферон-ИФА-БЕСТ», ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск, Россия; и другие).

  РЕАГЕНТЫ

Микропробирка R1 - содержит 0,5 мг порошка имитатора опухолевых антигенов.

Микропробирка R2 - содержит 0,5 мг порошка имитатора опухолевых антигенов.

Микропробирка C1 – пустая.

Микропробирка C2 – пустая.

  ПРИМЕНЕНИЕ

Подготовку клеток больного для проведения теста проводят следующим образом: утром натощак, берут 10 мл крови из вены в узкую пробирку с гепарином (20 единиц гепарина на 1 мл крови). Содержимое пробирки тщательно перемешивают. Кровь отстаивают в узкой пробирке до момента чёткого отделения эритроцитов от плазмы (60 минут). 2 мл плазмы, богатой лейкоцитами, снимают и переносят в новую пробирку. Содержимое пробирки с плазмой тщательно перемешивают перед добавлением в микропробирки R1, R2, C1 и C2.

В микропробирки R1, R2, C1 и C2 добавляют по 0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и по 0,4 мл плазмы. Микропробирки закрывают и тщательно перемешивают через каждые 5 минут в течение первых 15 минут. Помещают микропробирки в термостат, смеси инкубируют при 37⁰С в течение 16-24 часов.

Через 16-24 часа микропробирки извлекают из термостата и центрифугируют при 1000 об/мин 5 минут.  Надосадочную жидкость используют для определения ИФН-g .

Результат определения гамма-интерферона в пробах R1, R2, C1 и C2 твёрдофазным иммуноферментным анализом выражают в абсолютных значениях - МЕ/мл, либо в пг/мл.

Если содержание ИФН-g в пробах C1 и C2 равна или больше чем в R1 и R2, тест отрицательный. Если содержание ИФН-g в пробах R1 и R2 больше, чем в C1 и C2, расчет ведут по формуле:

  ((R1+R2)/2 - (C1+C2)/2))/(C1+C2)/2) х 100% 

где:

R1 – содержание ИФН-g в мл надосадочной жидкости опытной Микропробирки R1;

R2 – содержание ИФН-g в мл надосадочной жидкости опытной Микропробирки R2;

C1 – содержание ИФН-g в мл надосадочной жидкости контрольной Микропробирки C1;

C2 – содержание ИФН-g в мл надосадочной жидкости контрольной Микропробирки C2.

Превышение содержание ИФН-g в опыте меньше, чем на 20% по сравнению с контролем, тест отрицательный. Увеличение содержания ИФН-g в опыте более, чем на 20% по сравнению с контролем, указывает на положительный тест и соответствие иммунодоминантных эпитопов имитатора опухолевых антигенов РЕСАН иммунодоминантным эпитопам опухолевых антигенов этого человека.

  Результат теста выражают в проценте прироста ИФН-g или плюсах:

+ прирост содержания ИФН-g от 20 до 40%;

++ прирост содержания ИФН-g от 40 до 60%;

+++ прирост содержания ИФН-g от 60 до 80%;

++++ прирост содержания ИФН-g на 80% и более

  При исходно высоком содержании ИФН-g в контроле (более 60 пг/мл) реакция может быть ложноотрицательной.

Если содержание ИФН-g в контроле 0 пг/мл (или 0 МЕ/мл), а содержание в пробах и R1 и  R2 больше 0,025 пг/мл (или 0,35 МЕ/мл), то реакция положительная.

  Срок годности набора реагентов – 24 месяца со дня выпуска.

[ На главную страницу ][ Контактные реквизиты ][ Карта сайта ]

Гамма-интерферон (g -interferon, IFN-g) - инструкция

 Рекомбинантный гамма-интерферон, обладающий свойствами природного, получен из штамма-продуцента E. coli, в который встроена
плазмида, несущая рекомбинантный ген человеческого лейкоцитарного гамма-интерферона. В рекомбинантном гамма-интерфероне,
состоящим из 144 аминокислот, в отличие от природного, N-концевые остатки трех аминокислот (Cys-Tyr-Cys) заменены на
аминокислоту Met, и он не гликозилирован.

Инъекционная лекарственная форма препарата представляет собой однородную пористую массу или порошок белого или кремового
цвета, хорошо растворимый в воде. Водный раствор препарата бесцветен или имеет желтоватый оттенок, прозрачен либо со слабой
опалесценцией. В качестве стабилизатора содержит поливинилпирролидон, полиглюкин или реополиглюкин.

Технология получения рекомбинантного человеческого иммунного интерферона гамма-типа заключается в культивировании
штамма-продуцента E. coli с последующими выделением и очисткой путем денатурации, ренатурации и хроматографией.

Назначение

Гамма-интерферон применяют для коррекции нарушений клеточного иммунитета, а также для лечения инфекционных, аутоиммунных,
аллергических и онкологических заболеваний.

Применение

Для коррекции клеточного звена иммунитета человека необходимо сделать иммунологический анализ с определением уровней
лейкоцитов, лимфоцитов (общий), В-, Т- и NK-клеток, уровни иммуноглобулинов А-, М- ,G- и Е- (общий), фагоцитарную активность,
комплемент-связывающую активность и скорость оседания эритроцитов. В зависимости от отклонений в иммунном статусе человека
выбирается тактика назначения доз и длительность курса лечения гамма-интерфероном.

Препарат "Гамма-интерферон" можно применять в сочетании с другими цитокинами (альфа-интерферон, фактор некроза опухолей,
интерлейкин-2, колониестимулирующие факторы и др.), при этом он оказывает усиливающий эффект на действие цитокинов.

Препарат "Гамма-интерферон" наиболее эффективен при применении на ранних стадиях заболеваний и рекомендован для применения в составе комплексной терапии на поздних стадиях заболеваний.

Содержимое флакона (ампулы) растворяют в 1 мл стерильной дистиллированной воды и вводят внутримышечно. Вскрытые и
неиспользованные флаконы (ампулы) можно хранить при температуре не выше 4°С не более 12 часов, замораживание не допускается.

Противопоказаний для применения препарата нет.

Побочные эффекты

При парентеральном введении гамма-интерферона возможны озноб, повышение температуры, утомляемость, кожные высыпания и зуд. При обкалывании очага поражения – местная воспалительная реакция. Эти побочные явления обычно не являются препятствием для продолжения применения гамма-интерферона.
При местном применении препарата на слизистой оболочке возможны конъюнктивальная инъекция, гиперемия слизистой глаза, единичные фолликулы, отек конъюнктивы нижнего свода. При резко выраженных местных и общих побочных реакциях введение гамма-интерферона следует прекратить.

Форма выпуска

Гамма-интерферон выпускают в лиофилизированном виде во флаконах или в ампулах. Содержание активного гамма-интерферона –
300 тыс МЕ, 500 тыс МЕ и 1 млн МЕ в 1 флаконе (ампуле).

Гамма-интерферон нужно хранить в темном сухом месте при температуре не выше 4°C. Срок годности препарата 2 года.

[ На главную страницу ][ Контактные реквизиты ][ Карта сайта ]