Гамма-интерферон - набор для определение рецепторов на клетках человека

  Целью этой страницы является систематизация информации по цитокинам и диагностическим системам производства НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОГО ПРЕДПРИЯТИЯ РЕСАН, чтобы пациенты, врачи, иммунологи и все интересующиеся могли отыскать полную и достоверную информацию.

Аналитическая система определения рецепторов гамма-интерферона на клетках человека

НАЗНАЧЕНИЕ:
Специфические рецепторы к гамма-интерферону имеются на поверхности большинства клеток человека, но их экспрессия различна на различных клетках и при различных болезнях. Высокоаффинные рецепторы, содержащие 2 альфа и 2 бета цепи, имеют Т- и В-лимфоциты, NK-клетки, моноциты, макрофаги, фибробласты, нейтрофилы, эндотелиальные и гладкомышечные клетки. Константа связывания для рецепторов ИФН-g равна 1-5•10^-8М.
Взаимодействие гамма-интерферона (ИФН-g) с рецепторами на клетке является первым необходимым этапом начала его действия. ИФН-g может вызывать как защитные, так и патологические эффекты. Он индуцирует дифференцировку миелоидных клеток костного мозга, в результате которой они приобретают высокоаффинные Fcg-рецепторы для связывания мономерной формы IgG. На зрелых гранулоцитах ИФН-g индуцирует экспрессию Fcg-рецепторов промежуточной аффинности, которые связывают только агрегированный IgG. ИФН-g активирует и антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) осуществляемую зрелыми гранулоцитами. ИФН-g является активатором макрофагов и усиливает их противоопухолевую активность. При инфицировании макрофага внутриклеточными паразитами ИФН-g вызывает активацию макрофага, что приводит к гибели паразитов. Подавление внутриклеточных паразитов под действием ИФН-g происходит и в немакрофагальных клетках.
ИФН-g усиливает противоопухолевое действие цитотоксических лимфоцитов. Совместно с лимфотоксином, образуемым как СD4, так и СD8 лимфоцитами, ИФН-g подавляет рост опухолевых клеток. ИФН-g повышает неспецифическую активность NK-клеток, является одним из факторов дифференцировки В-лимфоцитов. Он может либо усиливать, либо подавлять В-клеточный иммунный ответ, на поздних стадиях ИФН-g усиливает секрецию иммуноглобулинов.
Очень важным действием ИФН-g является усиление экспрессии молекул HLA I и II классов на клеточной поверхности, причём ИФН-g быстрее индуцирует экспрессию молекул HLA DR и DP, чем DQ. Если усиление экспрессии молекул HLA I и II классов происходит на патологически изменённой клетке, она становится более доступной мишенью для последующего разрушения. Если это действие направлено на антигенпредставляющую клетку, то усиливается формирование иммунного ответа.
При вирусной инфекции ИФН-g может вызывать значительные изменения поверхности клеточной мембраны, что приводит к нарушению прикрепления и проникновения вируса в клетку. ИФН-g усиливает в клетке синтез фермента олигоаденилатсинтетазы. Олигоаденилатные полимеры активируют эндогенную эндонуклеазу, вызывающую разрушение иРНК и рРНК, нарушая внутриклеточный синтез вирусов. ИФН-g усиливает образование фермента протеинкиназы, вследствие чего подавляется белковый синтез.
ИФН-g активирует остеокласты, усиливая резорбцию костной ткани.
ИФН-g применяют для лечения инфекционных, онкологических, аутоиммунных и аллергических болезней. Эффективная доза ИФН-g находится в широком диапазоне 0,2-10000 МЕ в 1 мл крови, в зависимости от рецепторов на клетках, на которые направлено его действие. Недостаточная доза ИФН-g не приводит к желаемому терапевтическому эффекту, избыточная доза приводит к возникновению серьезных побочных эффектов.

ПРИМЕНЕНИЕ:
С помощью этой аналитической системы и проточного цитометра или флюоресцентного микроскопа можно in vitro определить распределение рецепторов к ИФН-g на клетках и индивидуально подобрать оптимальную терапевтическую дозу ИФН-g.

РЕАГЕНТЫ (входящие в набор):
Конъюгат hrIFNG-FITC-01A – 800 мкл, жидкий, 10 мкл на тест.

Рекомбинантный человеческий гамма-интерферон (hrIFNG) – 20 ампул по 1 млн МЕ, сухой.

Ориентировочная стоимость набора:
280 EUR

Гистограммы лимфоцитов:
А – исходное состоянии свободных рецепторов к гамма-интерферону на лимфоцитах (ворота от 6 до 12 каналов, пик – 17 событий).
Б – состоянии свободных рецепторов к гамма-интерферону на лимфоцитах после добавления ИФН-g в дозе 2500 МЕ на 1 мл крови (ворота от 6 до 11 каналов, пик – 8 событий)
В – состоянии свободных рецепторов к гамма-интерферону на лимфоцитах после добавления ИФН-g в дозе 100000 МЕ на 1 мл крови (ворота от 2 до 7 каналов, пик – 11 событий)

A     Б

 

В

Уменьшение свободных рецепторов до 60% от исходного (гистограмма Б), говорит об адекватно подобранной дозе ИФН-g.

Уменьшение свободных рецепторов более чем на 60% от исходного или значительое смещение гистограммы влево (В), говорит об избыточной дозе ИФН-g  и  высокой вероятности осложнений.

[ На главную страницу ][ Контактные реквизиты ][ Карта сайта ]

Многофункциональный флуоресцентный сканер
микробиочипов, клеток и тканей
высокой разрешающей способности
«BIOSCAN-F7000»

«BIOSCAN-F7000» - недорогой, быстрый и простой в использовании многофункциональный флуоресцентный сканер высокой разрешающей способности, позволяющий проводить многопараметрический анализ микробиочипов, клеток и тканей.
Рабочие возможности сканера позволяют использовать его для решения широкого круга диагностических и научно-исследовательских задач в области медицины, ветеринарии, биологии. Сканер имеет в своем составе 4 полупроводниковых лазера возбуждения для 4-х длин волн: 360 нм; 532 нм; 635 нм и 845 нм. Отличием сканера является наличие диапазонов длин волн 360 нм и 845 нм. Дополнительно могут быть установлены ещё 2 лазера с длинами волн излучения 488 нм и 591 нм. Преимуществом прибора является возможность переключения режимов работы: «на просвет» или «на отражение». Сканера имеет два функциональных алгоритма: «Работа» и «Исследование». Захват микроизображений осуществляется в реальном времени. Система считывания данных имеет высокую разрешающую способность - не менее 1,25 мкм, равную шагу анализа изображений, осуществляемого видеопроцессором.

ОСНОВНЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ:
1. Максимальная область сканирования 128x86 мм.
2. Размер пикселя в режиме «Работа» 2,5 мкм/пикс.
3. Размер пикселя в режиме «Исследование» 1,25 мкм/пикс.
4. Время сканирования и анализа 2,5 минуты на 1 слайд 25х75 мм.
5. Наличие фильтров записи 16 позиций (карусель).
6. Тип сенсора 18 мм растровый дефлектрон.
7. Размер поля видеопроцессора 2048 х 3072 пикселов.
8. Минимальный шаг анализа микроизображения не хуже 1,25 мкм.
9. Динамический диапазон цифрового сигнала 16 бит.
10. Вместимость цикла сканирования и анализа 1 слайд/планшет за цикл.
11. Пределы масштабирования изображения ячейки до 5 крат.
12. Габариты приборного модуля 200 х 420 х 490 мм.

Конструктивно «BIOSCAN-F7000» представляет собой комплекс, состоящий из Приборного модуля и Программно-вычислительного модуля на базе ПЭВМ типа IBM PC, имеющий специализированное программное обеспечение по анализу и обработке результатов исследования с отображением полученных данных на мониторе компьютера в удобном для врача или исследователя виде и выводом на принтер. Конструкция приборного модуля совместима с любыми микробиочипами, нанесенными на стандартные предметные стекла или таких же размеров непрозрачные носители. Кроме того, прибор может работать с микробиочипами, клетками и другими образцами, размещенными в стандартных 96-, 384- и 1536-луночных планшетах.
Специализированное программное обеспечение для сбора и анализа микроизображений совместимо с различными операционными системами (Linux или Windows).
По своим функциональным «BIOSCAN-F7000» заменяет все перечисленные приборы: иммуноферментный анализатор, денситометр, проточный цитометр, ридер биочипов, люменисцентный микроскоп. «BIOSCAN-F7000» позволяет использовать все известные тест-системы к перечисленным приборам. Многофункциональность, разрешающая способно, производительность, спектральный диапазон работы и возможности программной работы превосходят существующие аналоги.

Ориентировочная цена «BIOSCAN-F7000» с 4 лазерами и программным обеспечением - 12990 евро.

Примерная стоимость оборудования,
которое позволяет заменить BIOSCAN-F7000:

Иммуноферментный анализатор – 1700 - 4500 евро.
Денситометр – 4000 - 6000 евро.
Проточный цитометр – 150 000 – 300 000 евро.
Ридер биочипов – 18 000 – 60 000 евро.
Люменисцентный микроскоп – 2500 – 12 000 евро.

Общая стоимость заменяемого комплекта оборудования: 176000 - 380000 евро

 

Предприятие РЕСАН является разработчиком «BIOSCAN-F7000» и заключает официальные контракты на его изготовление и поставку.

 

[ На главную страницу ][ Контактные реквизиты ][ Карта сайта ]

Аналитическая система определения соответствия иммунодоминантных эпитопов антигенов РЕСАН индивидуальным опухолевым антигенам человека

1 тест 2 х 2

Тест определяет выделение гамма-интерферона (ИФН-g) из лейкоцитов свежей гепаринизированной крови под действием  имитаторов опухолевых антигенов РЕСАН. Гамма-интерферон продуцируется преимущественно Т-лимфоцитами, натуральными киллерами, а также В-лимфоцитами в ответ на опасные для организма антигены. Когда указанные клетки имеют дополнительный повторный контакт с аналогичным антигеном, то усиливают синтез и выделение в окружающую среду гамма-интерферона. Если иммунодоминантные эпитопы имитатора опухолевых антигенов РЕСАН соответствуют иммунодоминантным эпитопам опухолевых антигенов конкретного человека, то синтез гамма-имтерферона увеличится на 20% и более.

Циклоспорин А, метотрексат, дексаметазон, 1-альфа,25-дигидрокси витамин Д3 ингибируют синтез гамма-интерферона и должны быть отменены не менее чем за 7 дней до теста.

Определение гамма-интерферона проводят твёрдофазным иммуноферментным анализом с использованием тест системы для количественного определения (QuantiFERON^®- Cellestis Limited, Carnegie, Victoria, Australia; A-8752  «гамма-Интерферон-ИФА-БЕСТ», ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск, Россия; и другие).

  РЕАГЕНТЫ

Микропробирка R1 - содержит 0,5 мг порошка имитатора опухолевых антигенов.

Микропробирка R2 - содержит 0,5 мг порошка имитатора опухолевых антигенов.

Микропробирка C1 – пустая.

Микропробирка C2 – пустая.

  ПРИМЕНЕНИЕ

Подготовку клеток больного для проведения теста проводят следующим образом: утром натощак, берут 10 мл крови из вены в узкую пробирку с гепарином (20 единиц гепарина на 1 мл крови). Содержимое пробирки тщательно перемешивают. Кровь отстаивают в узкой пробирке до момента чёткого отделения эритроцитов от плазмы (60 минут). 2 мл плазмы, богатой лейкоцитами, снимают и переносят в новую пробирку. Содержимое пробирки с плазмой тщательно перемешивают перед добавлением в микропробирки R1, R2, C1 и C2.

В микропробирки R1, R2, C1 и C2 добавляют по 0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и по 0,4 мл плазмы. Микропробирки закрывают и тщательно перемешивают через каждые 5 минут в течение первых 15 минут. Помещают микропробирки в термостат, смеси инкубируют при 37⁰С в течение 16-24 часов.

Через 16-24 часа микропробирки извлекают из термостата и центрифугируют при 1000 об/мин 5 минут.  Надосадочную жидкость используют для определения ИФН-g .

Результат определения гамма-интерферона в пробах R1, R2, C1 и C2 твёрдофазным иммуноферментным анализом выражают в абсолютных значениях - МЕ/мл, либо в пг/мл.

Если содержание ИФН-g в пробах C1 и C2 равна или больше чем в R1 и R2, тест отрицательный. Если содержание ИФН-g в пробах R1 и R2 больше, чем в C1 и C2, расчет ведут по формуле:

  ((R1+R2)/2 - (C1+C2)/2))/(C1+C2)/2) х 100% 

где:

R1 – содержание ИФН-g в мл надосадочной жидкости опытной Микропробирки R1;

R2 – содержание ИФН-g в мл надосадочной жидкости опытной Микропробирки R2;

C1 – содержание ИФН-g в мл надосадочной жидкости контрольной Микропробирки C1;

C2 – содержание ИФН-g в мл надосадочной жидкости контрольной Микропробирки C2.

Превышение содержание ИФН-g в опыте меньше, чем на 20% по сравнению с контролем, тест отрицательный. Увеличение содержания ИФН-g в опыте более, чем на 20% по сравнению с контролем, указывает на положительный тест и соответствие иммунодоминантных эпитопов имитатора опухолевых антигенов РЕСАН иммунодоминантным эпитопам опухолевых антигенов этого человека.

  Результат теста выражают в проценте прироста ИФН-g или плюсах:

+ прирост содержания ИФН-g от 20 до 40%;

++ прирост содержания ИФН-g от 40 до 60%;

+++ прирост содержания ИФН-g от 60 до 80%;

++++ прирост содержания ИФН-g на 80% и более

  При исходно высоком содержании ИФН-g в контроле (более 60 пг/мл) реакция может быть ложноотрицательной.

Если содержание ИФН-g в контроле 0 пг/мл (или 0 МЕ/мл), а содержание в пробах и R1 и  R2 больше 0,025 пг/мл (или 0,35 МЕ/мл), то реакция положительная.

  Срок годности набора реагентов – 24 месяца со дня выпуска.

[ На главную страницу ][ Контактные реквизиты ][ Карта сайта ]

Гамма-интерферон (g -interferon, IFN-g) - инструкция

 Рекомбинантный гамма-интерферон, обладающий свойствами природного, получен из штамма-продуцента E. coli, в который встроена
плазмида, несущая рекомбинантный ген человеческого лейкоцитарного гамма-интерферона. В рекомбинантном гамма-интерфероне,
состоящим из 144 аминокислот, в отличие от природного, N-концевые остатки трех аминокислот (Cys-Tyr-Cys) заменены на
аминокислоту Met, и он не гликозилирован.

Инъекционная лекарственная форма препарата представляет собой однородную пористую массу или порошок белого или кремового
цвета, хорошо растворимый в воде. Водный раствор препарата бесцветен или имеет желтоватый оттенок, прозрачен либо со слабой
опалесценцией. В качестве стабилизатора содержит поливинилпирролидон, полиглюкин или реополиглюкин.

Технология получения рекомбинантного человеческого иммунного интерферона гамма-типа заключается в культивировании
штамма-продуцента E. coli с последующими выделением и очисткой путем денатурации, ренатурации и хроматографией.

Назначение

Гамма-интерферон применяют для коррекции нарушений клеточного иммунитета, а также для лечения инфекционных, аутоиммунных,
аллергических и онкологических заболеваний.

Применение

Для коррекции клеточного звена иммунитета человека необходимо сделать иммунологический анализ с определением уровней
лейкоцитов, лимфоцитов (общий), В-, Т- и NK-клеток, уровни иммуноглобулинов А-, М- ,G- и Е- (общий), фагоцитарную активность,
комплемент-связывающую активность и скорость оседания эритроцитов. В зависимости от отклонений в иммунном статусе человека
выбирается тактика назначения доз и длительность курса лечения гамма-интерфероном.

Препарат "Гамма-интерферон" можно применять в сочетании с другими цитокинами (альфа-интерферон, фактор некроза опухолей,
интерлейкин-2, колониестимулирующие факторы и др.), при этом он оказывает усиливающий эффект на действие цитокинов.

Препарат "Гамма-интерферон" наиболее эффективен при применении на ранних стадиях заболеваний и рекомендован для применения в составе комплексной терапии на поздних стадиях заболеваний.

Содержимое флакона (ампулы) растворяют в 1 мл стерильной дистиллированной воды и вводят внутримышечно. Вскрытые и
неиспользованные флаконы (ампулы) можно хранить при температуре не выше 4°С не более 12 часов, замораживание не допускается.

Противопоказаний для применения препарата нет.

Побочные эффекты

При парентеральном введении гамма-интерферона возможны озноб, повышение температуры, утомляемость, кожные высыпания и зуд. При обкалывании очага поражения – местная воспалительная реакция. Эти побочные явления обычно не являются препятствием для продолжения применения гамма-интерферона.
При местном применении препарата на слизистой оболочке возможны конъюнктивальная инъекция, гиперемия слизистой глаза, единичные фолликулы, отек конъюнктивы нижнего свода. При резко выраженных местных и общих побочных реакциях введение гамма-интерферона следует прекратить.

Форма выпуска

Гамма-интерферон выпускают в лиофилизированном виде во флаконах или в ампулах. Содержание активного гамма-интерферона –
300 тыс МЕ, 500 тыс МЕ и 1 млн МЕ в 1 флаконе (ампуле).

Гамма-интерферон нужно хранить в темном сухом месте при температуре не выше 4°C. Срок годности препарата 2 года.

[ На главную страницу ][ Контактные реквизиты ][ Карта сайта ]